De cellen worden vervolgens gedurende één uur bij 37 °C geïncubeerd met antimuis-immunoglobuline, geconjugeerd met fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC) of tetramethyl-rhodamine-5-(en 6-)isothiocyanaat (TRITC), als voornaamste antilichaam, verdund overeenkomstig de aanwijzingen van de leverancier, opnieuw in PBS-T gewassen, en gedroogd.
Anschließend werden die Zellen eine Stunde bei 37 °C unter Verwendung von Fluorescein-Isothiocyanat- (FITC) — oder mit Tetramethylrhodamin- 5- (und 6-) Isothiocyanat (TRITC)-konjugiertem anti-Maus-Immunglobulin als wichtigstem Antikörper, verdünnt nach Anweisungen des Lieferanten, inkubiert, nochmals gewaschen und getrocknet.